Antibiotics resistance in El Tor Vibrio cholerae 01 isolated during cholera outbreaks in Mozambique from 2012 to 2015

Rationale: Mozambique has recorded cyclically epidemic outbreaks of cholera. Antibiotic therapy is recommended in specific situations for management and control of cholera outbreaks. However, an increase in resistance rates to antibiotics by Vibrio cholerae has been reported in several epidemic outbreaks worldwide. On the other hand, there are few recent records of continuous surveillance of antibiotics susceptibility pattern of V. cholerae in Mozambique. Goals: The purpose of this study was to evaluate antibiotics resistance pattern of Vibrio cholerae O1 Ogawa isolated during Cholera outbreaks in Mozambique to commonly used antibiotics. Methodology: We analyzed data from samples received in the context of surveillance and response to Cholera outbreaks in the National Reference Laboratory of Microbiology from the National Institute of Health of Mozambique, 159 samples suspected of cholera from cholera treatment centers of, Metangula (09), Memba (01), Tete City (08), Moatize (01), Morrumbala (01) districts, City of Quelimane (01), Lichinga (06) and Nampula (86) districts, from 2012 to 2015. Laboratory culture and standard biochemical tests were employed to isolate and identify Vibrio cholerae; serotypes were determined by antisera agglutination reaction in blade. Biotype and presence of important virulence factors analysis was done by PCR. Antibiotics susceptibility pattern was detected by disk diffusion method Kirby Bauer. Antibiotic susceptibility and results were interpreted by following as per recommendations of CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) 2014. All samples were collected and tested in the context of Africhol Project, approved by the National Bioethics Committee for Health. Results: Among isolates from of Vibrio cholerae O1 El Tor Ogawa resistance to Sulphamethoxazole-trimethropim was 100% (53/53) to Trimethoprim-, being 100% (54/54) for Ampicillin, 99% (72/74) for Nalidixic Acid, 97% (64/66) to Chloramphenicol, 95% (42/44) for Nitrofurantoin and (19/20) Cotrimoxazole, 83% (80/97) Tetracycline, 56% (5/13) Doxycycline, 56% (39/70) Azithromycin and 0% (0/101) for Ciprofloxacin. PCR analysis suggested strains of V. cholerae O1 being descendants of the current seventh pandemic V. cholerae O1 CIRS 101 hybrid variant. The V. cholerae O1 currently causing cholera epidemics in north and central Mozambique confirmed a CTXΦ genotype and a molecular arrangement similar to the V. cholerae O1 CIRS 101. Conclusion: Although V. cholerae infections in Mozambique are generally not treated with antibiotics circulating strains of the bacteria showed high frequency of in vitro resistance to available antibiotics. Continuous monitoring of antibiotic resistance pattern of epidemic strains is therefore crucial since the appearance of antibiotic resistance can influence cholera control strategies.

Cholera Incidence and Mortality in Sub-Saharan African Sites during Multi-country Surveillance.

BACKGROUND: Cholera burden in Africa remains unknown, often because of weak national surveillance systems. We analyzed data from the African Cholera Surveillance Network (www.africhol.org). METHODS/ PRINCIPAL FINDINGS: During June 2011-December 2013, we conducted enhanced surveillance in seven zones and four outbreak sites in Togo, the Democratic Republic of Congo (DRC), Guinea, Uganda, Mozambique and Cote d'Ivoire. All health facilities treating cholera cases were included. Cholera incidences were calculated using culture-confirmed cholera cases and culture-confirmed cholera cases corrected for lack of culture testing usually due to overwhelmed health systems and imperfect test sensitivity. Of 13,377 reported suspected cases, 34% occurred in Conakry, Guinea, 47% in Goma, DRC, and 19% in the remaining sites. From 0-40% of suspected cases were aged under five years and from 0.3-86% had rice water stools. Within surveillance zones, 0-37% of suspected cases had confirmed cholera compared to 27-38% during outbreaks. Annual confirmed incidence per 10,000 population was <0.5 in surveillance zones, except Goma where it was 4.6. Goma and Conakry had corrected incidences of 20.2 and 5.8 respectively, while the other zones a median of 0.3. During outbreaks, corrected incidence varied from 2.6 to 13.0. Case fatality ratios ranged from 0-10% (median, 1%) by country. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: Across different African epidemiological contexts, substantial variation occurred in cholera incidence, age distribution, clinical presentation, culture confirmation, and testing frequency. These results can help guide preventive activities, including vaccine use.

Frequency of Pathogenic Paediatric Bacterial Meningitis in Mozambique: The Critical Role of Multiplex Real-Time Polymerase Chain Reaction to Estimate the Burden of Disease.

BACKGROUND: In Sub-Saharan Africa, including Mozambique, acute bacterial meningitis (ABM) represents a main cause of childhood mortality. The burden of ABM is seriously underestimated because of the poor performance of culture sampling, the primary method of ABM surveillance in the region. Low quality cerebrospinal fluid (CSF) samples and frequent consumption of antibiotics prior to sample collection lead to a high rate of false-negative results. To our knowledge, this study is the first to determine the frequency of ABM in Mozambique using real-time polymerase chain reaction (qPCR) and to compare results to those of culture sampling. METHOD: Between March 2013 and March 2014, CSF samples were collected at 3 regional hospitals from patients under 5 years of age, who met World Health Organization case definition criteria for ABM. Macroscopic examination, cytochemical study, culture, and qPCR were performed on all samples. RESULTS: A total of 369 CSF samples were collected from children clinically suspected of ABM. qPCR showed a significantly higher detection rate of ABM-causing pathogens when compared to culture (52.3% [193/369] versus 7.3% [27/369], p = 0.000). The frequency of Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, group B Streptococci, and Neisseria meningitidis were 32.8% (121/369), 12.2%, (45/369), 3.0% (16/369) and 4.3% (11/369), respectively, significantly higher compared to that obtained on culture (p < 0.001 for each). CONCLUSION: Our findings demonstrate that culture is less effective for the diagnosis of ABM than qPCR. The common use of culture rather than qPCR to identify ABM results in serious underestimation of the burden of the disease, and our findings strongly suggest that qPCR should be incorporated into surveillance activities for ABM. In addition, our data showed that S. pneumoniae represents the most common cause of ABM in children under 5 years of age.

Epidemic waves of cholera in the last two decades in Mozambique.

INTRODUCTION: Africa is increasingly affected by cholera. In Mozambique, cholera appeared in the early 1970s when the seventh pandemic entered Africa from the Indian subcontinent. In the following decades, several epidemics were registered in the country, the 1997-1999 epidemic being the most extended. Since then, Mozambique has been considered an endemic area for cholera, characterized by yearly outbreaks occurring with a seasonal pattern. At least three pandemic variants are thought to have originated in the Indian subcontinent and spread worldwide at different times. To understand the epidemiology of cholera in Mozambique, whether the disease re-emerges periodically or is imported by different routes of transmission, we investigated clinical V. cholerae O1 isolated during 1997-1999 and 2012-2014 epidemics. METHODOLOGY: By detecting and characterizing seven genetic elements, the mobilome profile of each isolate was obtained. By comparing it to known seventh pandemic reference strains, it was possible to discern among different V. cholerae O1 variants active in the country. RESULTS: During 1997-1999, epidemic strains showed two different genetic profiles, both related to a pandemic clone that originated from India and was reported in other African countries in the 1990s. Isolates from 2012-2014 outbreaks showed a genetic background related to the pandemic strains currently active as the prevalent causative agent of cholera worldwide. CONCLUSIONS: Despite cholera being endemic in Mozambique, the epidemiology of the disease in the past 20 years has been strongly influenced by the cholera seventh pandemic waves that originated in the Indian subcontinent.

Cholera epidemiology in Mozambique using national surveillance data.

BACKGROUND: Mozambique has experienced cholera for several decades. This study was undertaken to evaluate epidemiologic patterns to assist in guiding public health interventions. METHODS: We evaluated district-level Ministry of Health data for 123 consecutive weeks starting 1 January 2009. Cholera cases reported to the national level were based on clinical suspicion rather than microbiological confirmation. Time and space analyses with mapping and spatial statistics were undertaken. RESULTS: During 2009-2011, Mozambique identified 220 deaths among the 25 431 reported suspected cholera cases (case fatality ratio [CFR], 0.87%). There were 108 outbreaks that occurred in 73 (50%) of Mozambique's 145 districts. Five distinct spatial clusters were identified involving inland and coastal as well as rural and urban populations. Among 78 outbreaks whose duration was known, average duration was 7.2 weeks (median, 6; range, 1-25). During weeks 1-3, 4-6, 7-9, and ≥ 10 after an outbreak, CFRs were 1.6%, 0.66%, 0.33%, and 0.25%, respectively. During 2010, districts that experienced an outbreak during 2009 had a CFR of 0.2% compared with 4.3% among other districts. DISCUSSION: Mozambique continues to experience widespread cholera outbreaks of short duration involving distinct spatial clusters. These findings will influence choice of public health strategies.

Estudo dos aspectos soroepidemiológicos e imunológicos da infecção pelo vírus da hepatite B (hbv) em pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (hiv) atendidos no centro de saúde do alto-maé, maputo-moçambique / Study of the seroepidemiological and immunological aspects of infection by the hepatitis B virus (hbv) in patients infected with the human immunodeficiency virus (hiv) seen at the health center of alto-maé, Maputo Mozambique

A hepatite é uma doença infeccios a que constitui um problema de saúde pública mundial. De entre os diferentes vírus que causam hepatite, o vírus da hepatite B (HBV),representa uma das maiores causas mundiais de hepatite crônica, cirrose e carcinoma hepatocelular, apesar da vacina para hepatite B estar disponível desde os anos 80.Estudos de prevalência emÁfrica indicam que aproximadamente 50 milhões de pessoas são portadoras crônicas do HBV, com um risco de morte de até 25%. Na África Sub-Sahariana as prevalências dos vírus HBV e HIV são bastantes elevadas, que resulta em co-infecções e agrava o curso natural da infecção pelo HBV, com implicações nas estratégias terapêuticas para este grupo. O presente estudo tem como objectivo principal estudar os aspectos soroepidemiológicos e imunológicos da infecção pelo vírus da hepatite B em indivíduos com infecção por HIV. Este trabalho determina a prevalência do HBV, avalia alguns factores de risco associados à infecção por HBV e faz uma análise dos parâmetros imunológicos, relativos as células TCD4+ e TCD8+ em indivíduos HIV positivos. O estudo realizou-se no Centro de Saúde do Alto-Maé, entre Março a Junho de 2009. Participaram do estudo 1337 indivíduos de ambos os sexos. Foi feita uma colheita de amostra de sangue, e foi aplicado um questionário com variáveis sócio-demográficas de interesse para o estudo. Os factores de risco analisados foram: números de parceiros sexuais, consumo de álcool e tabaco, história de transfusão sanguínea, uso de drogas endovenosas, uso de outras drogas, história de ITS, história familiar de HBV, gravidez e aborto. As análises laboratoriais incluíram imunofenotipagem e contagem de linfócitos TCD4+ e TCD8+ e serologia para identificação do marcador HBsAg, através da técnica ELISA. Do total de indivíduos analisados, foi encontrada uma prevalência de HBsAg+ de16.0% (95%CI: 13.8-18.2%). Não foram encontrados associação entre os factores de risco analisados a presença de marcador HBsAg. Indivíduos co-infectados HIV/HBV apresentaram uma mediana de valores de células TCD4+, inferior aos indivíduos mono-infectados. Dentro do grupo de indivíduos co-infectados, verificou-se que uma grande percentagem destes possui níveis de células TCD4+<200 cel/mm3. Conclui-se que a prevalência da infecção por HBV nos indivíduos HIV+ é elevada e que estes poderão ter menos propensão para desenvolverem uma resposta imunológica adequada contra a infecção pelo HBV ou controlar a infecção pelo HIV.

Estudo dos aspectos soroepidemiológicos e imunológicos da infecção pelo vírus da hepatite b (hbv) em pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (hiv) atendidos no centro de saúde do alto-maé, maputo-moçambique / Study of seroepidemiological aspects and Immunization of Hepatitis Virus Infection b (hbv) in patients infected with the human immunodeficiency (hiv) treated at the Alto-maé Health Center, Maputocambique

A hepatite é uma doença infecciosa que constitui um problema de saúde pública mundial. Deentre os diferentes vírus que causam hepatite, o vírus da hepatite B (HBV),representa uma das maiores causas mundiais de hepatite crónica, cirrose e carcinoma hepatocelular, apesar da vacina para hepatite B estar disponível desde os anos 80.Estudos de prevalência em África indicam que aproximadamente 50 milhões de pessoas são portadoras crônicas do HBV, com um risco de morte de até 25%. Na África Sub-Sahariana as prevalências dos vírus HBV e HIV são bastantes elevadas, que resulta em co-infecções e agrava o curso natural da infecção pelo HBV, com implicações nas estratégias terapêuticas para este grupo. O presente estudo tem como objectivo principal estudar os aspectos soroepidemiológicos e imunológicos da infecção pelo vírus da hepatite Bem indivíduos com infecção por HIV. Este trabalho determina a prevalência do HBV, avalia alguns factores de risco associados à infecção por HBV e faz uma análise dos parâmetros imunológicos, relativos as células TCD4+ e TCD8+ em indivíduos HIV positivos. O estudo realizou-se no Centro de Saúde do Alto-Maé, entre Março a Junho de 2009. Participaram do estudo 1337 indivíduos de ambos os sexos. Foi feita uma colheita de amostra de sangue, e foi aplicado um questionário com variáveis sócio-demográficas de interesse para o estudo. Os factores de risco analisados foram: números de parceiros sexuais, consumo de álcool e tabaco, história de transfusão sanguínea, uso de drogas endovenosas, usode outras drogas, história deITS, história familiar de HBV, gravidez e aborto. As análises laboratoriais incluíram imunofenotipagem e contagem de linfócitos TCD4+ e TCD8+ e sorologia para identificação do marcador HBsAg, através da técnica ELISA. Do total de indivíduos analisados, foi encontrada uma prevalência de HBsAg+ de16.0% (95%CI: 13.8-18.2%). Não foram encontrados associação entre os factores de risco analisados e a presença de marcador HBsAg. Indivíduos co-infectados HIV/HBV apresentaram uma mediana de valores de células TCD4+, inferior aos indivíduos mono-infectados. Dentro do grupo de indivíduos co-infectados, verificou-se que uma grande percentagem destes possui níveis de células TCD4+<200 cel/mm3. Conclui-se que a prevalência da infecção por HBV nos indivíduos HIV+ é elevada e que estes poderão ter menos propensão para desenvolverem uma resposta imunológica adequada contra a infecção pelo HBV ou controlar a infecção pelo HIV.

Avaliação da resposta imunológica contra o vírus do sarampo em crianças de 9 meses de idade, expostas e infectadas pelo vírus da imunodeficiência humana (hiv) / Evaluation of the immunological response against measles virus in children of 9 months of age, exposed and infected by the virus of human immunodeficiency (hiv)

O sarampo é uma doença viral altamente infecciosa causada por um vírus denominado morbilivírus e para o qual os seres humanos são os únicos reservatórios. Esta doença constitui um grande problema de saúde pública, especialmente em Países de baixos recursos económicos, e onde a elevada prevalência do HIV influencia o perfil epidemiológico desta doença. Objectivo: O presente estudo tem como objectivo principal avaliar a influência da exposição ao HIV e da infecção pelo HIV na imunidade contra o sarampo em crianças com 9 meses de idade. Metodologia: O presente estudo realizou-se no Centro de Saúde do 1º de Maio e no Hospital Geral de Chamanculo na Cidade de Maputo. Participaram do estudo 182 crianças que compareceram aos Centros de Saúde para a vacinação contra o sarampo aos 9 meses de idade, onde foi efectuada uma colheita de sangue; foi aplicado um questionário com as variáveis sóciodemográficas de interesse para o estudo e solicitou-se as mães que regressarem um mês depois para uma nova colheita. As análises laboratoriais incluíram: análise serológica para IgG e IgM contra o vírus do sarampo, serologia para HIV através de teste rápido, ELISA e PCR, e ainda contagem de Linfócitos TCD4+ e TCD8+ por imunofenotipagem; As crianças foram classificadas em três grupos, não expostas HIV-, expostas HIV+ e expostas HIV-. Resultados: Das 182 crianças que foram recrutadas para o estudo, 97,8% não apresentaram títulos detectáveis de anticorpos IgG aos 9 meses. Mães HIV+ apresentaram uma média geométrica de títulos IgG de 1574.0 e as mães HIV­ apresentaram uma média geométrica de 1241.7; Mães com idade igual ou superior a 30 anos apresentaram uma média geométrica de títulos IgG de 2060.6 e mães com idade inferior a 30 apresentaram uma média de 1245.0. Não se verificaram grandes variações nos valores de Linfócitos TCD4+ e TCD8 nos três grupos de estudo, um mês depois da vacina. Durante este período 32.7 % das crianças que compareceram apresentaram resultados positivos para IgG, 44.2% resultado indeterminado e 22.9% resultado negativo. Das crianças expostas HIV-, 45.0% apresentaram um resultado indeterminado e 20.0% apresentaram um resultado negativo. No grupo de crianças HIV positivas, 1/3 apresentaram resultado indeterminado para IgG contra o sarampo, e a mesma proporção apresentou um resultado negativo. Conclusão: Estes dados revelam que aos 9 meses as crianças não possuem títulos IgG protectores contra o sarampo o que pode tornar as crianças susceptíveis a contraírem sarampo antes da idade recomendada para a vacinação, e ainda que um grupo destas não apresenta títulos IgM um mês após a vacina o que demonstra uma possibilidade de algumas crianças apresentarem falha vacinal.